维C银翘片的胶束动电毛细管色谱分析
作者：尹茶 吴玉田
单位：尹茶 吴玉田(第二军医大学药学院药物分析教研室 上海 200433)
关键词：维C银翘片；胶束动电毛细管色谱
药物分析杂志000109 摘 要：目的：用胶束动电毛细管色谱法测定维C银翘片中扑热息痛、扑尔敏、氯原酸和维生素C的含量。考察了不同条件下的电泳行为。方法：以含40 mmol.L-1脱氧胆酸钠的20 mmol.L-1硼砂溶液(pH 9.11)为运行缓冲液，毛细管有效长度为55 cm(ID 75 μm)，以肉桂酸为内标，于254 nm波长处测定。结果：扑热息痛、扑尔敏、氯原酸和维生素C的加样回收率分别为99.6%，99.9%，99.3%，99.7%；RSD分别为1.0%，1.4%，1.7%，1.8%。结论：本方法操作简便、快速、准确。
, 百拇医药
Determination of Active Constituents in VC Yinqiao Tablets
by Micellar Electrokinetic Capillary Chromatography
Yin Cha Wu Yutian
(Department of Drug Analysis,School of Pharmacy,Second Military Medical University,Shanghai 200433)
Abstract：Objective：A micellar electrokinetic capillary chromatographic(MECC) method for the simultaneous determination of four active constituents (chlorogenic acid,acetaminophen,chlorphenamine maleate and vitamin C) in VC Yinqiao tablets was developed.Method:The running buffer solution was 20 mmol.L-1 sodium borate buffer(pH 9.11) added 40 mmol.L-1 SDC.The internal standard was cinnamic acid.The capillary column efficient length was 55 cm(ID 75 μm).Results:The recoveries of acetaminophen,chlorphenamine maleate,chlorogenic acid and vitamin C were 99.6%,99.9%,99.3% and 99.7%,respectively.Conclusion:This method is convenient,rapid and accurate.
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Key words：VC Yinqiao tablets,micellar electrokinetic capillary chromatography▲
维C银翘片由多种中西药成分组成，是常用感冒药，各省药品标准中均有收载。每片含维生素C 33 mg、扑尔敏0.7 mg、扑热息痛70 mg、银翘浸膏(主要有效成分为氯原酸)100 mg及挥发油等。文献报道一阶导数光谱法[1]、差示分光光度法[2]、双波长薄层扫描法[3]、高效液相色谱法[4]等可用于维C银翘片中扑热息痛、扑尔敏或氯原酸的含量测定。高效毛细管电泳法(HPCE)是近年发展起来的分析方法，已用于复方感冒制剂的分析[5，6]，但同时分离上述4种成分未见报道。本文用HPCE的胶束动电毛细管色谱(MECC)模式成功地分离了扑热息痛、扑尔敏、维生素C和氯原酸，并以肉桂酸为内标进行含量测定，结果令人满意，为维C银翘片的质量控制提供了准确、快速的方法。
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1 仪器与试药
Capillary Ion Analyzer毛细管离子分析仪(美国Waters公司)；扑热息痛、扑尔敏、维生素C对照品(纯度99%以上)由药厂提供，氯原酸、肉桂酸(内标)购自中国药品生物制品检定所(纯度99%以上)；脱氧胆酸钠(SDC)为进口分装；所有化学试剂均为分析纯。维C银翘片样品A和B均为市售。Branson 1200超声波振荡器。
2 方法与结果
2.1 电泳条件 熔融石英毛细管柱：60 cm×75 μm，有效长度55 cm；电解液：20 mmol.L-1硼砂溶液，其中含40 mmol.L-1 SDC(pH 9.11)；运行电压，20 kV;温度，25 ℃；柱上紫外检测，254 nm;虹吸进样，进样时间5 s。每天开机后以0.1 mol.L-1氢氧化钠溶液冲柱3 min，水冲柱3 min，再用电解液冲柱6 min。2次进样之间以缓冲液冲柱2 min。
, 百拇医药
2.2 标准曲线的绘制 精密称取肉桂酸适量，以50%乙醇溶解成2 mg.L-1的内标溶液。精密称取扑热息痛、扑尔敏、氯原酸及维生素C适量，加入内标溶液25 μL，以50%乙醇稀释至25 mL，作为贮备液。配制系列对照品溶液，在上述电泳条件下，以对照品的浓度X(mg.L-1)为横坐标，以对照品的校正峰面积(峰面积/迁移时间)与内标的校正峰面积之比Y为纵坐标，绘制标准曲线。结果见表1。
表1 对照品的线性范围、回归方程和相关系数 对照品
线性范围
/mg.L-1
回归方程
r
, 百拇医药
扑尔敏
8.48～84.8
Y=3.97×10-2+5.98×10-2X
0.9991
氯原酸
6.98～69.8
Y=-6.68×10-2+1.25×10-1X
0.9999
扑热息痛
16.2～129
Y=4.53×10-1+7.42×10-2X
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0.9988
维生素C
8.40～67.2
Y=1.08×10-1+4.20×10-2X
0.9982
2.3 精密度 低、中、高3个浓度的对照品溶液：扑热息痛(16.2，48.5，80.8 mg.L-1)、扑尔敏(8.48，25.4，42.4 mg.L-1)、氯原酸(6.98，20.9，34.9 mg.L-1)和维生素C(8.40，25.2，42.0 mg.L-1)，重复进样6次。校正峰面积之比的日内精密度RSD在2.0%以内，日间精密度RSD在3.0%以内。
, 百拇医药
2.4 检测限 当信噪比为3时，测得组分的检测限分别为：扑热息痛 2.02 mg.L-1，扑尔敏 4.24 mg.L-1，氯原酸 3.49 mg.L-1，维生素C 4.20 mg.L-1。
2.5 加样回收率 向已知含量的样品中加入对照品(扑热息痛1.414 mg，扑尔敏0.742 mg，氯原酸0.654 mg，维生素C 0.735 mg)，依样品含量测定方法进行分析。各组分的平均回收率±RSD (n=9)分别为：扑尔敏(99.9±1.4)%，氯原酸(99.3±1.7)%，扑热息痛(99.6±1.0)%，维生素C(99.7±1.8)%。
2.6 样品含量测定 取样品10片，剥去糖衣，精密称定后研成细粉。精密称取片粉适量(约相当于扑热息痛70 mg)，置于25 mL容量瓶中。加入50%乙醇20 mL，超声波振荡20 min，取出放至室温，精确加入内标溶液25 μL，加溶剂至刻度，混匀。过滤后以续滤液进样，依法测定扑尔敏和氯原酸的含量。精确吸取续滤液0.5 mL，再加内标溶液适量使浓度为2 μg.L-1，以50%乙醇稀释至25 mL，依法测定扑热息痛和维生素C的含量，结果见表2。表2 维C银翘片中四组分的每片含量(mg，n=3) 成分
, 百拇医药
样品A
样品B
扑热息痛
69.87
69.94
扑尔敏
0.693
0.697
氯原酸
0.726
0.695
维生素C
32.63
, 百拇医药
32.92
3 讨论
3.1 在区带电泳模式下，扑尔敏峰拖尾严重，扑热息痛峰为前沿峰；加入有机溶剂甲醇、乙腈等虽能在一定程度上改善峰形，但分析时间大大延长，因此我们选择了MECC模式。当20 mmol.L-1硼砂缓冲液中含有SDC的浓度分别为10，20，30，40，50 mmol.L-1时，迁移时间与SDC浓度的关系见图1。当SDC的浓度为40 mmol.L-1时，扑尔敏的峰形基本对称且能与其它峰完全分离；低于此浓度时，扑尔敏峰拖尾明显；而高于40 mmol.L-1时，扑尔敏的迁移时间滞后，延长了分析时间。
图1 20 mmol.L-1硼砂溶液中SDC的浓度与迁移时间的关系
, 百拇医药
1.扑热息痛 2.维生素C 3.氯原酸 4.扑尔敏
3.2 考察了邻氨基苯甲酸、双氯灭痛等作内标的可能性，邻氨基苯甲酸出峰时间太迟，而双氯灭痛与待测样品的杂质峰重叠。最终选肉桂酸为内标，它出峰时间居中且与样品提取液中各峰无干扰，峰形对称、重现性好。图2和图3分别为对照品电泳图谱和维C银翘片提取液的电泳图谱。
图2 对照品电泳图谱
1.扑热息痛 2.维生素C 3.肉桂酸(内标)
4.氯原酸 5.扑尔敏
图3 样品的电泳图谱
, 百拇医药
A.测定扑热息痛和维生素C B.测定氯原酸和扑尔敏
1～5.同图1
3.3 维C银翘片中，扑热息痛的含量为扑尔敏的100倍，进行分析时内标物与被测组分的峰不易匹配，而且高浓度反复测定会使扑热息痛峰出现裂峰，所以在含量测定时需将样品稀释后才能定量扑热息痛。
3.4 氯原酸和扑尔敏受热见光易分解，维生素C的性质也不稳定，因此配制溶液用棕色容量瓶，在4 ℃冰箱中贮存，用前取出放置至室温后才进样。■
参考文献：
[1]杨秋芳，李春庭，刘勇.一阶导数光谱法测定维C银翘片中对乙酰氨基酚的含量.中成药，1990，12(12)：8
[2]顾青.差示分光光度法测定维C银翘片中扑热息痛含量.药物分析杂志，1993，13(1)：35
, 百拇医药
[3]崔友.双波长薄层扫描法测定维C银翘片中扑热息痛和扑尔敏的含量.药物分析杂志，1993，13(2)：125
[4]张丹，李章万，姜焱.HPLC测定金银花、茵陈及其10种中成药中绿原酸的含量.药物分析杂志，1996，16(2)：83
[5]刘新宇，候美琴.高效毛细管电泳法测定复方感冒制剂的研究.药物分析杂志，1997，17(5)：315
[6]邹定，吴学军，南国柱.复方感冒制剂的胶束动电毛细管色谱分析.药物分析杂志，1997，17(3)：160
收稿日期：1998-10-21, http://www.100md.com
单位：尹茶 吴玉田(第二军医大学药学院药物分析教研室 上海 200433)
关键词：维C银翘片；胶束动电毛细管色谱
药物分析杂志000109 摘 要：目的：用胶束动电毛细管色谱法测定维C银翘片中扑热息痛、扑尔敏、氯原酸和维生素C的含量。考察了不同条件下的电泳行为。方法：以含40 mmol.L-1脱氧胆酸钠的20 mmol.L-1硼砂溶液(pH 9.11)为运行缓冲液，毛细管有效长度为55 cm(ID 75 μm)，以肉桂酸为内标，于254 nm波长处测定。结果：扑热息痛、扑尔敏、氯原酸和维生素C的加样回收率分别为99.6%，99.9%，99.3%，99.7%；RSD分别为1.0%，1.4%，1.7%，1.8%。结论：本方法操作简便、快速、准确。
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Determination of Active Constituents in VC Yinqiao Tablets
by Micellar Electrokinetic Capillary Chromatography
Yin Cha Wu Yutian
(Department of Drug Analysis,School of Pharmacy,Second Military Medical University,Shanghai 200433)
Abstract：Objective：A micellar electrokinetic capillary chromatographic(MECC) method for the simultaneous determination of four active constituents (chlorogenic acid,acetaminophen,chlorphenamine maleate and vitamin C) in VC Yinqiao tablets was developed.Method:The running buffer solution was 20 mmol.L-1 sodium borate buffer(pH 9.11) added 40 mmol.L-1 SDC.The internal standard was cinnamic acid.The capillary column efficient length was 55 cm(ID 75 μm).Results:The recoveries of acetaminophen,chlorphenamine maleate,chlorogenic acid and vitamin C were 99.6%,99.9%,99.3% and 99.7%,respectively.Conclusion:This method is convenient,rapid and accurate.
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Key words：VC Yinqiao tablets,micellar electrokinetic capillary chromatography▲
维C银翘片由多种中西药成分组成，是常用感冒药，各省药品标准中均有收载。每片含维生素C 33 mg、扑尔敏0.7 mg、扑热息痛70 mg、银翘浸膏(主要有效成分为氯原酸)100 mg及挥发油等。文献报道一阶导数光谱法[1]、差示分光光度法[2]、双波长薄层扫描法[3]、高效液相色谱法[4]等可用于维C银翘片中扑热息痛、扑尔敏或氯原酸的含量测定。高效毛细管电泳法(HPCE)是近年发展起来的分析方法，已用于复方感冒制剂的分析[5，6]，但同时分离上述4种成分未见报道。本文用HPCE的胶束动电毛细管色谱(MECC)模式成功地分离了扑热息痛、扑尔敏、维生素C和氯原酸，并以肉桂酸为内标进行含量测定，结果令人满意，为维C银翘片的质量控制提供了准确、快速的方法。
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1 仪器与试药
Capillary Ion Analyzer毛细管离子分析仪(美国Waters公司)；扑热息痛、扑尔敏、维生素C对照品(纯度99%以上)由药厂提供，氯原酸、肉桂酸(内标)购自中国药品生物制品检定所(纯度99%以上)；脱氧胆酸钠(SDC)为进口分装；所有化学试剂均为分析纯。维C银翘片样品A和B均为市售。Branson 1200超声波振荡器。
2 方法与结果
2.1 电泳条件 熔融石英毛细管柱：60 cm×75 μm，有效长度55 cm；电解液：20 mmol.L-1硼砂溶液，其中含40 mmol.L-1 SDC(pH 9.11)；运行电压，20 kV;温度，25 ℃；柱上紫外检测，254 nm;虹吸进样，进样时间5 s。每天开机后以0.1 mol.L-1氢氧化钠溶液冲柱3 min，水冲柱3 min，再用电解液冲柱6 min。2次进样之间以缓冲液冲柱2 min。
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2.2 标准曲线的绘制 精密称取肉桂酸适量，以50%乙醇溶解成2 mg.L-1的内标溶液。精密称取扑热息痛、扑尔敏、氯原酸及维生素C适量，加入内标溶液25 μL，以50%乙醇稀释至25 mL，作为贮备液。配制系列对照品溶液，在上述电泳条件下，以对照品的浓度X(mg.L-1)为横坐标，以对照品的校正峰面积(峰面积/迁移时间)与内标的校正峰面积之比Y为纵坐标，绘制标准曲线。结果见表1。
表1 对照品的线性范围、回归方程和相关系数 对照品
线性范围
/mg.L-1
回归方程
r
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扑尔敏
8.48～84.8
Y=3.97×10-2+5.98×10-2X
0.9991
氯原酸
6.98～69.8
Y=-6.68×10-2+1.25×10-1X
0.9999
扑热息痛
16.2～129
Y=4.53×10-1+7.42×10-2X
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0.9988
维生素C
8.40～67.2
Y=1.08×10-1+4.20×10-2X
0.9982
2.3 精密度 低、中、高3个浓度的对照品溶液：扑热息痛(16.2，48.5，80.8 mg.L-1)、扑尔敏(8.48，25.4，42.4 mg.L-1)、氯原酸(6.98，20.9，34.9 mg.L-1)和维生素C(8.40，25.2，42.0 mg.L-1)，重复进样6次。校正峰面积之比的日内精密度RSD在2.0%以内，日间精密度RSD在3.0%以内。
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2.4 检测限 当信噪比为3时，测得组分的检测限分别为：扑热息痛 2.02 mg.L-1，扑尔敏 4.24 mg.L-1，氯原酸 3.49 mg.L-1，维生素C 4.20 mg.L-1。
2.5 加样回收率 向已知含量的样品中加入对照品(扑热息痛1.414 mg，扑尔敏0.742 mg，氯原酸0.654 mg，维生素C 0.735 mg)，依样品含量测定方法进行分析。各组分的平均回收率±RSD (n=9)分别为：扑尔敏(99.9±1.4)%，氯原酸(99.3±1.7)%，扑热息痛(99.6±1.0)%，维生素C(99.7±1.8)%。
2.6 样品含量测定 取样品10片，剥去糖衣，精密称定后研成细粉。精密称取片粉适量(约相当于扑热息痛70 mg)，置于25 mL容量瓶中。加入50%乙醇20 mL，超声波振荡20 min，取出放至室温，精确加入内标溶液25 μL，加溶剂至刻度，混匀。过滤后以续滤液进样，依法测定扑尔敏和氯原酸的含量。精确吸取续滤液0.5 mL，再加内标溶液适量使浓度为2 μg.L-1，以50%乙醇稀释至25 mL，依法测定扑热息痛和维生素C的含量，结果见表2。表2 维C银翘片中四组分的每片含量(mg，n=3) 成分
, 百拇医药
样品A
样品B
扑热息痛
69.87
69.94
扑尔敏
0.693
0.697
氯原酸
0.726
0.695
维生素C
32.63
, 百拇医药
32.92
3 讨论
3.1 在区带电泳模式下，扑尔敏峰拖尾严重，扑热息痛峰为前沿峰；加入有机溶剂甲醇、乙腈等虽能在一定程度上改善峰形，但分析时间大大延长，因此我们选择了MECC模式。当20 mmol.L-1硼砂缓冲液中含有SDC的浓度分别为10，20，30，40，50 mmol.L-1时，迁移时间与SDC浓度的关系见图1。当SDC的浓度为40 mmol.L-1时，扑尔敏的峰形基本对称且能与其它峰完全分离；低于此浓度时，扑尔敏峰拖尾明显；而高于40 mmol.L-1时，扑尔敏的迁移时间滞后，延长了分析时间。
图1 20 mmol.L-1硼砂溶液中SDC的浓度与迁移时间的关系
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1.扑热息痛 2.维生素C 3.氯原酸 4.扑尔敏
3.2 考察了邻氨基苯甲酸、双氯灭痛等作内标的可能性，邻氨基苯甲酸出峰时间太迟，而双氯灭痛与待测样品的杂质峰重叠。最终选肉桂酸为内标，它出峰时间居中且与样品提取液中各峰无干扰，峰形对称、重现性好。图2和图3分别为对照品电泳图谱和维C银翘片提取液的电泳图谱。
图2 对照品电泳图谱
1.扑热息痛 2.维生素C 3.肉桂酸(内标)
4.氯原酸 5.扑尔敏
图3 样品的电泳图谱
, 百拇医药
A.测定扑热息痛和维生素C B.测定氯原酸和扑尔敏
1～5.同图1
3.3 维C银翘片中，扑热息痛的含量为扑尔敏的100倍，进行分析时内标物与被测组分的峰不易匹配，而且高浓度反复测定会使扑热息痛峰出现裂峰，所以在含量测定时需将样品稀释后才能定量扑热息痛。
3.4 氯原酸和扑尔敏受热见光易分解，维生素C的性质也不稳定，因此配制溶液用棕色容量瓶，在4 ℃冰箱中贮存，用前取出放置至室温后才进样。■
参考文献：
[1]杨秋芳，李春庭，刘勇.一阶导数光谱法测定维C银翘片中对乙酰氨基酚的含量.中成药，1990，12(12)：8
[2]顾青.差示分光光度法测定维C银翘片中扑热息痛含量.药物分析杂志，1993，13(1)：35
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[3]崔友.双波长薄层扫描法测定维C银翘片中扑热息痛和扑尔敏的含量.药物分析杂志，1993，13(2)：125
[4]张丹，李章万，姜焱.HPLC测定金银花、茵陈及其10种中成药中绿原酸的含量.药物分析杂志，1996，16(2)：83
[5]刘新宇，候美琴.高效毛细管电泳法测定复方感冒制剂的研究.药物分析杂志，1997，17(5)：315
[6]邹定，吴学军，南国柱.复方感冒制剂的胶束动电毛细管色谱分析.药物分析杂志，1997，17(3)：160
收稿日期：1998-10-21, http://www.100md.com